酵母雙雜交技術原理和步驟

酵母雙雜交技術（Yeast Two-Hybrid）是一種用來研究蛋白質相互作用的實驗技術。該技術利用酵母細胞的自身特性，使得兩個蛋白質分別與介導轉錄激活的Gal4轉錄因子不同區域結合，從而激發酵母細胞內特定的報告基因（reporter gene）的表達。當兩個蛋白質的結合能夠激活報告基因的表達，則表明這兩個蛋白質之間存在相互作用關係。

具體實驗步驟如下：

1.構建酵母表達載體：將含有自身複製元件2μ、酵母轉錄起始序列、選擇性篩選的標記基因等元件的酵母表達載體與感興趣的蛋白質基因融合，在表達載體中得到融合基因。

2.構建Gal4轉錄因子啟動子激活報告基因的表達載體：將報告基因與Gal4轉錄因子啟動子串聯，在表達載體中得到表達Gal4轉錄因子的表達載體。

3.轉化酵母細胞：將構建好的兩個表達載體同時轉化到酵母細胞中。

4.萃取細胞蛋白並交聯：萃取酵母細胞蛋白，並將兩種表達載體融合的蛋白交聯。

5.篩選報告基因表達情況：觀察酵母細胞是否表達出了報告基因，如表達了則表明兩個融合蛋白之間存在相互作用。

該技術廣泛應用於生物醫學領域中，用於篩選蛋白質相互作用靶標，揭示細胞內信號傳遞和調控機制，並研究許多疾病的發生發展機制。